Иммуногистохимическое исследование

Иммуногистохимия основана на взаимодействии антигенов и антител. Антигены — это специфические молекулы (белки), присутствующие на клеточной поверхности или внутри клеток, которые выступают в качестве маркеров биологических процессов. Антитела — белки, которые распознают и связываются с антигенами. Для ИГХ используются антитела, меченные особыми метками, что позволяет визуализировать результат под микроскопом.

Принципы метода можно свести к следующим этапам: специфичность антител, которые строго взаимодействуют с конкретным антигеном; использование меченых антител для визуализации взаимодействия; определение локализации антигена в клетке или ткани. Эти принципы обеспечивают высокую точность и надёжность метода.

Существует два основных подхода к иммуногистохимическому исследованию. Прямой метод подразумевает использование меченых антител, которые сразу связываются с антигеном. Непрямой метод предполагает добавление второго антитела, которое связывается с первым, что усиливает сигнал и увеличивает чувствительность метода.

Этапы проведения

ИГХ проводится в несколько последовательных этапов, каждый из которых требует высокой точности.

• Забор материала. Материал для исследования чаще всего получают с помощью биопсии или хирургического удаления ткани. Забор материала может быть выполнен при подозрении на онкологические заболевания, воспалительные процессы или инфекционные патологии.
• Фиксация ткани. Образец обрабатывают формалином для сохранения его структуры и предотвращения разложения. Этот этап особенно важен, поскольку неправильная фиксация может повлиять на доступность антигенов.
• Обработка ткани и её заливка в парафин. Процесс включает обезвоживание образца спиртами, очищение ксилолом и последующую заливку в парафин. Парафиновые блоки позволяют сохранить ткани в стабильном состоянии для дальнейшей работы.
• Пприготовление срезов. Тонкие срезы ткани (4-5 мкм) изготавливаются с помощью микротома. Они помещаются на предметные стекла, которые затем проходят этап депарафинизации и регидратации.
• Окрашивание антителами. Тканевые срезы инкубируют с первичными антителами, которые связываются с целевыми антигенами. Затем добавляют вторичные антитела с метками, что позволяет увидеть взаимодействие под микроскопом.
• Визуализация. Результаты анализируют под микроскопом, чтобы выявить локализацию антигенов, их количество и распределение. Этот этап важен для интерпретации данных и дальнейших клинических решений.

Преимущества и ограничения метода

ИГХ обладает рядом преимуществ, которые делают его незаменимым в современной медицине. Прежде всего, это высокая специфичность, которая позволяет определить наличие и локализацию антигена. Кроме того, метод даёт возможность количественной оценки экспрессии белков. Ещё одним важным преимуществом является возможность изучения долговременно хранящихся образцов, поскольку парафиновые блоки сохраняют свою стабильность годами.

Однако у метода есть и ограничения. Одно из них — зависимость от качества антител. Некачественные антитела могут привести к ложноположительным или ложноотрицательным результатам. Кроме того, процесс подготовки образцов требует строгого соблюдения протоколов, так как ошибки на этом этапе могут исказить результаты. Метод также требует квалифицированного персонала и специализированного оборудования.

Иммуногистохимия остаётся важным инструментом диагностики, который помогает врачам принимать обоснованные решения. Это метод, который объединяет в себе точность, надёжность и универсальность, делая его одним из ключевых в современной медицинской практике.